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Desenvolvimento de um ELISA baseado na captura da enzima malato desidrogenase citoplasmática recombinante de Trypanosoma congolense

Ferreira Raquelina Ângela, Neves Luis, Boulangé Alain. 2016. Desenvolvimento de um ELISA baseado na captura da enzima malato desidrogenase citoplasmática recombinante de Trypanosoma congolense. In : Investigação para o desenvolvimento: tendências, desafios e perspetivas. Maputo : Universidade Eduardo Mondlane, Résumé, 1 p. Conferência Científica da Universidade Eduardo Mondlane. 9, Maputo, Mozambique, 27 September 2016/28 September 2016.

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Abstract : A tripanossomose africana é uma hemoparasitose transmitida pela mosca tsé-tsé que afeta o homem e os animais, causando grandes perdas económicas. Os principais agentes causadores são o T. congolense, T. vivax e T. brucei spp. A principal medida de controlo é a quimioterapia e quimioprofilaxia, embora limitada pelo número de tripanocidas disponíveis. Assim, o diagnóstico torna-se uma ferramenta importante pois permite o desenho de tratamento adequados, todavia, os métodos existentes não são satisfatórios. Neste contexto abriu-se espaço para o desenvolvimento dum teste ELISA de captura de antigénios circulantes, que detecta infeções ativas, com a vantagem de poder ser adaptado em formato ``dipstick´´. A malato desidrogenase citoplasmática (cMDH) foi escolhida como antigénio candidato devido à sua abundância na corrente sanguínea de hospedeiros após lise do tripanossoma, e a possibilidade de deteção enzimática. A fim de expressar a forma recombinante da cMDH, a sequência codificante da proteína foi clonada no plasmídeo pTZ57R/T, seguido da sub-clonagem no plasmídeo de expressão pET32a na estirpe Escherichia coli BL21(DH3). Após indução por IPTG foi produzido uma proteína solúvel. Com a proteina imunizou-se dois coelhos e duas galinhas para obtenção de anticorpos policlonais, os quais foram usados para desenvolver o teste de ELISA de captura. A cMDH recombinate, é uma proteina com 55 kDa de peso molecular. Os anticorpos produzidos em coelho e em galinha mostraram capacidade de reconhecimento da cMDH nativa de T. congolense presente em soro de bovinos infectados, num sistema ELISA de captura e imunoblot. Este estudo demonstra que os anticorpos policlonais produzidos são capazes de capturar a cMDH nativa em soro de animais infectados por T. congolense com diferentes níveis de parasitémia. Estes resultados sugerem que o sistema de captura do cMDH pode ser desenvolvido e validado como um ELISA de captura para o diagnóstico de campo de infecções Trypanosoma congolense. (Texte intégral)

Classification Agris : L72 - Pests of animals
L73 - Animal diseases
000 - Autres thèmes

Auteurs et affiliations

  • Ferreira Raquelina Ângela, Eduardo Mondlane University (MOZ)
  • Neves Luis, Eduardo Mondlane University (MOZ)
  • Boulangé Alain, CIRAD-BIOS-UMR TRYPANOSOMES (MOZ)

Source : Cirad-Agritrop (https://agritrop.cirad.fr/584356/)

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