Valentin Bertille. 1996. Contribution à la mise au point d'une technique de transformation de suspensions cellulaires de bananiers (AAA, AAB) par bombardement de particules. Villeneuve d'Ascq : Université de Lille 1, 40 p. Mémoire DESS : Génie cellulaire et moléculaire : Université de Lille 1
Résumé : Dans le cadre du programme d'amélioration génétique du bananier du CIRAD, un procédé de transformation génétique au moyen d'un canon à particules a été développé. Le travail a été effectué sur des suspensions des cultivars Grande naine (banane dessert) et French sombre (banane à cuire). Une étude histologique des suspensions a été réalisée afin de déterminer les cellules embryogènes, cibles de la transformation. Les suspensions de Grande naine présentent des agrégats friables et hétérogènes possédant des cellules desquamantes et dégénérescentes en périphérie qui ne peuvent être considérées comme des cellules cibles. Les cellules embryogènes sont situées plus à l'intérieur de l'agrégat. La suspension de French sombre est constituée d'agrégats d'aspect compact dont les cellules possèdent toutes des caractéristiques embryogènes. Plusieurs voies de recherche ont été testées afin de favoriser la transformation des cellules cibles par le plasmide ILTAB 309 qui contient le gène gus et le gène hph de résistance à l'hygromycine. La culture d'une suspension cellulaire de Grande naine sur un milieu modifié a permis d'obtenir des agrégats cellulaires plus compacts que chez le témoin. Le bombardement de ce matériel a permis la croissance de nodules résistants à l'hygrornycine, et positifs au test GUS après 60 jours de culture, indiquant probablement que cette suspension possède une plus grande aptitude à être tranformée. Une digestion enzymatique partielle de la suspension de Grande naine avant le tir et une modification de la force du tir n'ont pas permis de sélectionner des structures résistantes à l'hygromycine appliquée à une dose de 50 mg/l. La transformation d'une suspension de French sombre a démontré l'efficacité d'une pré-culture en milieu solide avant le tir et a permis d'obtenir des embryons résistants à l'hygromycine et GUS positifs. Des plantules poussant sur le milieu de croissance/enracinement en présence d'hygromycine ont été régénérées à partir de ces embryons. Ceci suggère que des plantes transformées ont été obtenues. Compte tenu de l'absence d'une réponse positive nette au test histochimique gus chez ces plantes, l'intégration du gène devra cependant être vérifiée par analyse moléculaire.
Auteurs et affiliations
- Valentin Bertille, Université de Lille 1 (FRA)
Autres liens de la publication
Source : Cirad - Agritrop (https://agritrop.cirad.fr/479329/)
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