Charbit Erika. 2002. Recherche de marqueurs moléculaires de la capacité embryogène et de la capacité régénérante des cals friables d'Hevea brasiliensis (Muëll. Arg.). Montpellier : UM2, 148 p. Thèse de doctorat : Physiologie végétale : Université Montpellier 2
Encadrement : Carron, Marc-Philippe
Résumé : La technique de l'embryogenèse somatique de l'hévéa à partir de cals friables entretenus permet la propagation à grande échelle d'individus élites. Ce procédé présente cependant des limitations empêchant son industrialisation. L'obtention de marqueurs moléculaires permettant de connaître précocement les capacités embryogènes et régénérantes des cals est une étape importante de l'amélioration du procédé. Dans un premier temps, la technique du differential display a été mise au point pour les cals friables d'hévéa: une méthode de purification des ARN permettant d'éliminer les polysaccharides a permis d'obtenir des ARN totaux de haute qualité convenant aux étapes de rétro-transcription et d'amplification par PCR. Les analyses histologiques et moléculaires ont été menées sur quatre lignées de cals friables du clone PB260, ayant des capacités embryogènes et régénérantes différentes. L'analyse histologique des cals a montré que les amas cellulaires sont plus gros et plus cohésifs dans les lignées embryogènes et régénérantes, alors que les cals des lignées non embryogènes sont constitués de cellules dissociées entre elles et peu actives. D'autres caractères sont reliés à la capacité régénérante: dans les cals embryogènes non régénérants, les nodules embryogènes se forment à partir du huitième jour de l'induction alors qu'ils sont présents dès le quatrième jour dans les lignées embryogènes régénérantes. De plus, une partie des nodules dégénère précocement par vacuolisation dans les cals non régénérants. Les expériences de differential display ont permis de retenir 27 ADNc différentiellement exprimés au cours de l'induction dans la lignée embryogène régénérante. Quatre de ces ADNc sont par ailleurs différentiellement exprimés à J0 selon les capacités embryogènes et régénérantes des lignées: deux de ces ADNc permettent de différencier les cals selon leur capacité embryogène et deux autres permettent de différencier les cals selon leur capacité régénérante. Les connaissances acquises permettent d'envisager à terme un outil de diagnostic précoce des capacités embryogènes et regénérantes des cals friables d'hévéa. L'étude poussée des marqueurs obtenus lors de ces travaux permettra de mieux connaître les gènes et les phénomènes métaboliques intervenant dans l'embryogenèse somatique.
Mots-clés Agrovoc : Hevea brasiliensis, Embryogénèse somatique, analyse histocytologique, marqueur génétique, culture in vitro, développement embryonnaire, cal, expression des gènes, biologie moléculaire, hybridation d'ADN
Classification Agris : F30 - Génétique et amélioration des plantes
Auteurs et affiliations
- Charbit Erika, CIRAD-CP-HEVEA (FRA)
Autres liens de la publication
Source : Cirad - Agritrop (https://agritrop.cirad.fr/512723/)
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