Essai d'obtention d'anticorps contre agents phytopathogènes non cultivés : mise au point d'un test de sélection des hybridomes

Iskra Marie-Line. 1985. Essai d'obtention d'anticorps contre agents phytopathogènes non cultivés : mise au point d'un test de sélection des hybridomes. Bordeaux : Université de Bordeaux II, 79 p. Mémoire DEA : Biochimie, microbiologie, biologie des organismes. Pathologie microbienne et virale : Université de Bordeaux II

Résumé : L'essai BA Elisa, tel qu'il est employé, a la potentialité de mettre en évidence l'hybridome produisant un anticorps antiprotéine de MLO. Cependant, il peut encore être amélioré. L'avidine a la capacité de fixer quatre molécules de biotine. Dans l'essai BA Elisa, cette propriété n'a pas encore été utilisée. Un essai Elisa biotine avidine biotine (BAB Elisa) est envisagé. Il consiste en la fixation de la première biotine, comme dans l'essai BA Elisa par addition de fragments Fab'2 anti-IgG de souris biotinylés, puis le complexe de révélation formé par une molécule d'avidine ayant fixé trois molécules de biotine péroxydase, est ajouté et se fixe à la première biotine. Cet essai qui devrait augmenter significativement la sensibilité du test BA Elisa est en fait limité à cause de problèmes d'encombrement stérique et d'une augmentation du bruit de fond. Afin d'éliminer ces inconvénients, l'avidine peut être remplacée par de la streptavidine et la liaison de la biotine aux anticorps peut être réalisée en intercalant un " bras d'espacement ". Un essai utilisant de tels réactifs sera développé. Mais la principale amélioration serait une plus grande purification de l'antigène, autrement que par l'obtention des tubes criblés qui reste une technique longue et fastidieuse. L'utilisation de colonnes d'affinité du type protéine A sépharose sur lesquelles un sérum polyclonal anti-protéine de pervenche serait adsorbé, permettrait de retenir spécifiquement les protéines de pervenche et de récupérer ainsi une fraction enrichie en protéines de MLO.

Auteurs et affiliations

• Iskra Marie-Line ORCID: 0000-0003-4486-2449

Source : Cirad-Agritrop (https://agritrop.cirad.fr/608761/)

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