Araújo Santos Taís, Oliveira Barbosa Ana Cláudia, Santana Silva Amanda Gabrielly, Gutierrez Dina, Chabannes Matthieu, Fortes Ferreira Claudia.
2018. Validação de protocolo de extração de RNA sem uso de nitrogênio líquido e avaliação da “vida de prateleira” de pellets.
In : Revista Recursos Genéticos News - RG News: Edição especial - Anais do V Congresso Brasileiro de Recursos Genéticos - Fortaleza 06 a 09 de novembro de 2018. Sociedade Brasileira de recursos Genéticos
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Version publiée
- Portugais
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Editeur : http://www.recursosgeneticos.org/noticia/revista-rg-news
Résumé : A extração de RNA de plantas a partir de tecidos específicos é o primeiro passo para estudos de expressão gênica e caracterização de transcritos. Nos protocolos de rotina, o uso do nitrogênio líquido é indispensável para auxiliar a retirada dos ácidos nucleicos do interior das células durante o processo de maceração. No entanto, sabe-se que o custo do de nitrogênio líquido é bastante elevado. A possibilidade de aliar rapidez à robustez e baixo custo aos protocolos, contribui para o dinamismo e contenção de gastos em laboratórios, que, ao final de um ano, podem trazer muitos benefícios. Com o aumento do uso de técnicas de sequenciamento de alto high-throughput (HTS), muitas vezes conduzido no exterior, o RNA acaba sendo degradado na chegada ao destino final – principalmente com a proibição recente das companhias aéreas do uso do gelo seco para manter a integridade da molécula. Portanto, o objetivo da proposta foi validar um novo protocolo para extração de RNA com uso de furadeira de bancada, bem como avaliar a “vida de prateleira” dos pellets de RNA de forma a promover um transporte mais adequado permitindo menor degradação da molécula. Para isso foram feitas as extrações do RNA de folhas e raízes das principais culturas da Embrapa Mandioca e Fruticultura, a citar: bananeira, abacaxi, citros, mamão, maracujá e mandioca. A integridade do RNA total das folhas e raízes foram validadas via géis de agarose 1%. Uma vez obtidos os pellets de RNA, foi avaliada a “vida de prateleira” dos mesmos, onde as amostras foram submetidas à temperatura ambiente por 21 dias. A extração de ácidos nucleicos com uso da furadeira de bancada foi idealizada no CIRAD – Baillarguet em Montpellier – França e CIP-Lima Peru. O método de extração com auxílio da furadeira de bancada mostrou-se eficiente na obtenção de RNA de qualidade, que está contribuindo para redução de gastos no laboratório de Biologia Molecular. O teste de conservação do pellet de RNA “vida de prateleira” foi altamente satisfatório, com manutenção da integridade da molécula visualizada em gel de agarose 1% após 3 semanas em bancada em temperatura ambiente. Certamente essa informação é de grande valia também para os pesquisadores que dependem do transporte de RNA para outros países visando análises HTS.
Mots-clés libres : RNA, Extraction, Liquid nitrogen, Furadeira de bancada, Manihot esculenta, Fruteiras
Auteurs et affiliations
- Araújo Santos Taís, UFRB (BRA)
- Oliveira Barbosa Ana Cláudia, UESC (BRA)
- Santana Silva Amanda Gabrielly, UFRB (BRA)
- Gutierrez Dina, INIA (PER)
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Chabannes Matthieu, CIRAD-BIOS-UMR BGPI (FRA)
ORCID: 0000-0001-5754-5982
- Fortes Ferreira Claudia, EMBRAPA (BRA)
Source : Cirad-Agritrop (https://agritrop.cirad.fr/590788/)
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