Detection of Xanthomonas campestris pv. citri by the polymerase chain reaction method

Hartung J.S., Daniel Jean-François, Pruvost Olivier. 1993. Detection of Xanthomonas campestris pv. citri by the polymerase chain reaction method. Applied and Environmental Microbiology, 59 (4) : 1143-1148.

Autre titre : Détection de Xanthomonas campestris pv. citri par la technique PCR (polymerase chain reaction)

Résumé : Le plasmide pFL1 a été obtenu après clonage d'un fragment d'ADN plasmidique isolé de Xanthomonas campestris pv. citri XC62 dans le vecteur pUC9. La séquence nucléotidique de pFL1 a été déterminée en vue d'appliquer la technique PCR pour la détection de Xanthomonas campestris pv. citri, l'agent causal du chancre bactérien des agrumes. 7 amorces de 18 pb ont été testées pour amplifier de l'ADN de X. c. pv. citri et de X. campestris associé au "citrus bacterial spot". 4 paires d'amorces ont permis d'amplifier l'ADN cible de X. c. pv. citri mais pas des souches de X. campestris associé au "citrus bacterial spot". La paire d'amorces 2-3 a permis l'amplification spécifique de l'ADN cible des souches du pathotype A, mais aucun signal n'a été obtenu après amplification lorsque de l'ADN de souches des autres pathotypes a été testé. L'utilisation d'un tampon pH 9,0 contenant 1 % de triton X100 et 0,1 % de gélatine est absolument nécessaire pour que l'amplification de l'ADN cible, qui a un ratio G+C de 61 % se produise. Cette technique a permis de détecter 25 pg d'ADN purifié ou environ 10 bactéries lorsque des "Southern blots" ont été réalisés après l'électrophorèse. Ces niveaux de détection représentent une augmentation de sensibilité près de 100 fois supérieure à une hybridation utilisant la même sonde dans un format "dot blot"

Mots-clés Agrovoc : Citrus, Clonage moléculaire, adn, hybridation moléculaire, plasmide, sonde à adn, chancre

Mots-clés complémentaires : Xanthomonas campestris pv. citri, Chancre citrique

Classification Agris : H20 - Maladies des plantes

Auteurs et affiliations

• Hartung J.S.
• Daniel Jean-François
• Pruvost Olivier

Source : Cirad - Agritrop (https://agritrop.cirad.fr/395673/)

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