Détection de Xanthomonas campestris pv. citri, agent du chancre bactérien des agrumes, par NESTED-PCR : Optimisation de la technique et mise au point d'un protocole quantitatif, application dans le cadre d'une étude d'écologie microbienne

Villemot Isabelle. 1994. Détection de Xanthomonas campestris pv. citri, agent du chancre bactérien des agrumes, par NESTED-PCR : Optimisation de la technique et mise au point d'un protocole quantitatif, application dans le cadre d'une étude d'écologie microbienne. Lille : Université de sciences et technologies de Lille, 116 p. Mémoire DESS : Génie Cellulaire et Moléculaire : Université des sciences et techniques du Languedoc

Résumé : Xanthomonas campestris pv. citri (X.c.c.), agent du chancre bactérien des agrumes, est un organisme de quarantaine. La lutte contre la maladie exige de disposer de techniques de détection fiables et sensibles. La N-PCR basée sur l'amplification en deux séries d'une région plasmidique hautement conservée chez X.c.c. permet de détecter de 1 à 10 copies de la séquence cible que ce soit à partir d'ADN purifié ou de cellules bactériennes intactes. L'amplification est inhibée par l'hydroxyde de cuivre, agent chimique de lutte contre la maladie et par les extraits concentrés de Clémentinier et de Tangelo. Le dénombrement des bactéries dans les symptômes folliaires est réalisable par N-PCR quantitative, protocole basé sur la coamplification de l'ADN cible avec un ADN compétiteur servant de standard de concentration. La méthode DIANA (détection des Acides Nucléiques Amplifiés et Immobilisés) permet de détecter les produits d'amplification par colorimétrie grâce à l'utilisation d'amorces marquées. Ses performances sont identiques à celles de la détection électrophorétique. L'application de la N-PCR dans le cadre d'études d'écologie microbienne montre que la culture sur milieux gélosés sélectifs est plus sensible que la N-PCR

Mots-clés Agrovoc : Citrus, Xanthomonas campestris, identification, PCR, adn, Clonage moléculaire, marqueur génétique, écologie microbienne, chancre

Mots-clés complémentaires : Chancre citrique

Classification Agris : H20 - Maladies des plantes

Auteurs et affiliations

• Villemot Isabelle, USTL [Université des sciences et techniques du Languedoc] (FRA)

Source : Cirad - Agritrop (https://agritrop.cirad.fr/326050/)

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