Obtenção de produtos de PCR dos principais fungos causadores de doenças no cacaueiro visando estudos filogeneticos e taxonômicos : [Resumo]

Santos Rogério M.F., Lemos L.S.L., Juca F.F., Dos Santos M.V.O., Kruschewsky M.C., Ganem Rodrigo Sousa, Clément Didier, Micheli Fabienne, Gramacho Karina Peres. 2010. Obtenção de produtos de PCR dos principais fungos causadores de doenças no cacaueiro visando estudos filogeneticos e taxonômicos : [Resumo]. In : Resumos do 56° Congresso Brasileiro de Genética, 14 a 17 de setembro de 2010, Guaruja, Brasil. Sociedade Brasileira de Genética. s.l. : s.n., 127. Congresso Brasileiro de Genética. 56, Guaruja, Brésil, 14 Septembre 2010/17 Septembre 2010.

Résumé : Onde é cultivado, o cacaueiro (#Theobroma cacao# L.) é alvo de várias doenças de grande impacto econômico. Entre estas estão a vassoura-de-bruxa (#Moniliophthora perniciosa#), podridão-parda (#Phytophthora# spp.), monilíase (#Moniliophthora roreri#) e a murcha de Ceratocystis (#Ceratocystis cacafunesta#). O conhecimento da biologia destes fitopatogenos é essencial para estabelecer um manejo eficiente das doenças. As limitações metodológicas para seqüenciamento de genes de interesse têm sido a extração do DNA e a amplificação de regiões especificas com qualidade satisfatória, ou seja, que permitam o uso com sucesso dos produtos da amplificação em reações de seqüenciamento e em métodos moleculares comparativos. Nesse sentido, nosso objetivo foi determinar as condições ótimas das reações de PCR para amplificação de regiões ribossomais, dentre outras, as quais vêm sendo usadas rotineiramente no FITOMOL no auxilio da taxonomia molecular e filogenia destes fitopatogenos. Isolados de quatro espécies de fungos em estudo (#M. perniciosa#, #Phytophthora# spp., #M. roreri# e #Ceratocystis cacaofunesta#) tiveram seu DNA extraído segundo protocolos específicos para cada espécie. O DNA foi quantificado e determinado sua qualidade utilizando gel de agarose a 1%. A otimização das condições da PCR foi avaliada segundo dois aspectos: concentração final do DNA template na reação (10, 25 e 50 ng/ul) e concentração dos primers (4, 10 e 20 pmol/ul) em reações com volumes finais de 20 ul e 50 ul. Os resultados demonstram que as condições ótimas para amplificação das regiões em estudo é uma reação com volume final de 20 ul, 10 ng/ul de DNA template e concentração do primer a 4 pmol/ul, Os resultados mostram que uma menor concentração de DNA deve ser utilizada, o que é desejável levando em consideração as dificuldades de obtenção de micélio e extração do DNA em fungos, bem como uma economia em relação aos reagentes utilizados na PCR. Esta abordagem provou ser de sucesso para amplificação de regiões ribossomais utilizados na rotina de identificação e genotipagem de fungos no nosso laboratório. Apoio financeiro: Fapesb, CNPq e CEPLAC. (Texte intégral)

Mots-clés Agrovoc : Theobroma cacao, Moniliophthora, Ceratocystis, Phytophthora, agent pathogène, taxonomie, gène

Mots-clés géographiques Agrovoc : Brésil

Mots-clés complémentaires : Moniliophthora perniciosa, Moniliophthora roreri, Ceratocystis cacaofunesta, Réaction de polymérisation en chaîne

Classification Agris : F30 - Génétique et amélioration des plantes
H20 - Maladies des plantes

Auteurs et affiliations

• Santos Rogério M.F.
• Lemos L.S.L.
• Juca F.F.
• Dos Santos M.V.O., CEPEC (BRA)
• Kruschewsky M.C.
• Ganem Rodrigo Sousa, CEPEC (BRA)
• Clément Didier, CIRAD-BIOS-UMR DAP (BRA) ORCID: 0000-0002-7602-6472
• Micheli Fabienne, CIRAD-BIOS-UMR DAP (BRA)
• Gramacho Karina Peres, CEPLAC (BRA)

Source : Cirad - Agritrop (https://agritrop.cirad.fr/558710/)

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